预实验即在正式科研项目开始之前所做的初步研究(Pilot Study)是预实验,是必不可少的环节。初步研究预先对实验方法进行测试,探索项目的可行性,是科研设计方法中不可或缺的组成部分。用小规模的投入,得到初步的结果,确认和优化之后的大规模项目的方案。初步研究虽然不能完全保证正式研究项目的成功,但能极大提高项目顺利进行的可能性。
具体到多重免疫荧光染色mIHC/mIF,一般是由用户提供所需数量的测试样本,在1~4周内完成以下两部分预试验,再根据结果与用户沟通,设计符合用户需求的专属方案。
一、检测抗体特异性
商用的一抗本身具有特异性差异,同时单个抗体在使用不同浓度的时候也会出现特异性差异(一般是浓度越低越特异)。因此,为了能保证一抗能非常特异的标记目标组织蛋白,我们会针对panel中每一个待测一抗,进行不同浓度的抗体特异性检测,如果是成熟抗体则进行效果验证。最终将结果发送给用户,由用户判定其特异性是否符合预期。
二、检测多重染色可行性
由于不同组织以及组织处理方式的不同会导致其物理特性有所差异,一般含脂以及含水较多的组织会更脆弱一些,固定不足的样本会更容易脱片,因此客户提供的样片能经历的染色次数可能会有所差异。因此,我们需要根据客户对特定组织切片的特定多色panel实施预染色测试,确定其能实现客户期望的多重染色结果。
其他说明:
1)待测试抗体可以由客户提供,或客户指定抗体公司及货号,由本公司代为订购;
2)测试使用的组织切片由客户提供,或指定组织进行测试;
3)本公司提供的已验证抗体列表中的抗体一般无需进行抗体特异性测试;
4)按照 多重免疫荧光染色样本要求 处理的切片一般无需进行多重染色预实验测试。